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荧光显微镜的滤色系统和照明选择

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在荧光显微镜中,荧光光源装置是提供一定波长的激发光使标本受激发射荧光,再通过显微镜的物镜,B镜系统使荧光图象放大以供观察,因此,一般来说,任何显微镜都可以用于荧光显微术。

  滤色系统是徕卡荧光显微镜的重要部分,它由激发滤片(第一相片)和抑制滤片(第二滤只)所组成。前者提供一定波长范围的激发光,后者提供相应波长范围的荧光。其玻片通常用有色玻璃组成。其型号各国均不相同。

  荧光显微镜激发滤片根据光源和荧光色突的特点,可分为露外光激发滤片,紫氏光激发滤片和紫外蓝光激发滤片。荧光显微镜所需激发滤片的厚度,主要根据所用显微镜激发方式而定,暗场荧光显微术要求激发滤片薄一些,明场时则要求厚一些,因为使用暗场时激发光不会按进入物镜,另外还得考虑标本情况和目的性,基本原则是以获得明亮的荧光相最好的背景衬托为准。

  荧光显微镜抑制滤片的选择,主要根据激发滤只而定。其原则是以完全吸收激发光为目的,透过任何可见光(完全互补)以保护眼睛不受紫外光的刺激和损害。为与激发滤片相对应,抑制滤片也可分为:紫外光抑制滤片、紫蓝光抑制滤片和紫外验光抑制滤址。

  上面介绍了荧光显微镜的滤色系统后,再来了解下荧光显微镜的照明选择根据什么来考虑。

  荧光显微镜的照明可根据聚光器的构造和激发光的波长按以下三点考虑:

  ①从荧光像的反差要求来看,UV激发暗场聚光器照明最好。

  ②以像的亮度来考虑,BV激发滤光片暗场观察效率最高。

  ③UV激发滤光片暗场观察和BV激发暗场聚光器照明的特性,可看作介于这两种照明方法之间,但前者滤光片暗场的性质较强,显示图像较明亮,反差小;后者因保留暗场光路的性质,故显示图像较暗,而反差有所改善。当实际使用荧光显微镜时,应采用最适合标本要求的照明法进行观察。

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